巴马拟缨鱼(Pseudocrossocheilus bamaensis)俗称巴马油鱼，隶属鲤形目(Cypriniformes)鲤科(Cyprinidae)野鲮亚科(Labeoninae)穗唇鲃属(Crossocheilus)，原产于广西河池市巴马瑶族自治县的盘阳河^[1]。巴马拟缨鱼肉质鲜美，营养价值较高，近年来由于过度捕捞导致其野生种群资源量急剧下降。目前，关于巴马拟缨鱼的研究报道不多。程光平^[1]研究了巴马拟缨鱼地理种群的差异性，年龄与体长、体质量的线性关系，性腺发育不同分期的性腺特征及细胞时相，以及巴马拟缨鱼人工养殖方法。庞卫等^[2]分析了野生巴马拟缨鱼的肌肉营养成分，发现其肌肉中蛋白质含量高，脂肪含量适中，富含各类氨基酸及不饱和脂肪酸，具有较高的营养价值。杨芳等^[3]研究表明，巴马拟缨鱼的新陈代谢水平与养殖水温呈正相关，水温在10-25 ℃最佳。张曼等^[4]研究发现，嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是引起巴马拟缨鱼暴发性死亡的主要病原菌。一直以来，在市场上销售的巴马拟缨鱼均为野外捕获，人工繁殖尚未取得成功，因而开展野生巴马拟缨鱼繁殖生物学研究，对巴马拟缨鱼的人工繁殖有着至关重要的作用。本研究以广西红水河都安段红渡河群体为研究对象，研究其性腺组织结构、性腺发育分期和群体年龄结构的四季分布特点，拟为巴马拟缨鱼种质资源保护和人工繁殖提供基础资料。

1 材料与方法 1.1 材料

实验鱼的季节性样品群采自广西红水河都安段红渡河，均为当地渔民捕捞巴马拟缨鱼群体的随机样本。采样期分别为2020年3月、2020年6月、2020年9月和2021年1月，4个不同采样期的样本分别称为春季、夏季、秋季和冬季样本群，每个季节雌、雄样本群共14-15尾。总体样本雌鱼34尾，雄鱼25尾，雌雄比为1.36∶1；雌鱼体质量为(51.53±20.55) g，体长为(13.35±3.50) cm；雄鱼体质量为(39.59±19.31) g，体长为(12.04±3.48) cm。

1.2 年龄鉴定和性腺分期

巴马拟缨鱼年龄鉴定主要参考张学健^[5]和谢玺等^[6]的方法。性腺分期主要参考程光平^[1]和崔丹等^[7]的方法，同时结合其性腺形态、色泽及组织切片情况进行划分。

1.3 性腺观察及切片的制作

活体状态下测量常规生物学数据，解剖后肉眼观察性别及性腺发育情况，拍照并记录色泽等其他外形特征。取性腺样本修块、标记，在组织脱水机中经梯度酒精脱水处理17 h，二甲苯透明，石蜡包埋，连续切片(厚度5-6 μm)、展片、烤片、HE染色、封片、晾干，用Nikon台式显微镜观察，并拍照记录。

1.4 数据分析

采用Excel 2016软件进行数据处理分析。

2 结果与分析 2.1 年龄组成

巴马拟缨鱼红渡河群体全年年龄组成共5个龄组，主要龄段是2龄(45.76%)和3龄(38.98%)，占全年年龄组成的84.74%。春季样本群主要龄段为2龄(92.86%)；夏季为3龄(53.33%)；秋季为2龄和3龄，共占秋季5个龄组的73.33%；冬季为3龄(60.00%)。雌性巴马拟缨鱼春季样本群仅有2龄，夏季主要龄段为3龄(66.67%)，秋季为3龄(44.44%)，冬季为2龄(50.00%)。雄性巴马拟缨鱼春季样本群主要龄段为2龄(83.33%)，夏季为2龄和3龄(共83.33%)，冬季为3龄(85.71%)。巴马拟缨鱼雌鱼主繁殖群体(3龄)在夏季占比最高(66.67%)，雄鱼主繁殖群体(3龄)在冬季占比最高(85.71%)(表 1)。

2.2 性腺分期

巴马拟缨鱼全年样本群体，雌、雄鱼均以Ⅱ期时相为主，其次是Ⅲ期，最少为Ⅳ期。2龄雌鱼Ⅱ期时相占比最高(32.35%)，3龄雌鱼Ⅲ期时相占比最高(20.59%)。2龄和3龄雄鱼Ⅱ期时相占比相同且最高(32.00%)。巴马拟缨鱼春季样本群体卵巢性腺期以Ⅲ期为主(62.50%)，夏季大多处于Ⅲ期(44.44%)和Ⅳ期(44.44%)，秋季以Ⅱ期为主(77.78%)，冬季以Ⅱ期为主(62.50%)。雄鱼春季样本群体精巢性腺期全部为Ⅱ期，夏季以Ⅲ期为主(83.33%)，秋季和冬季精巢全部退化为Ⅱ期。Ⅳ期卵巢均出现于夏季3龄组和4龄组，Ⅳ期精巢只出现于夏季2龄组(表 2、表 3)。

2.3 卵巢发育季节性变化特点

巴马拟缨鱼卵巢发育阶段如图 1所示。Ⅱ期卵巢紧贴体壁，呈半透明细小的偏棒状，表面可见一条较粗血管，卵粒呈极小半透明颗粒(图 1: a)。Ⅲ期卵巢呈浅黄色，体积比Ⅱ期卵巢明显增加，肉眼可见不能分离的浅黄色卵粒(图 1: b)。Ⅳ期初期卵巢呈深黄色，表面血管变粗并有许多微细血管纵横交错，砖色大小不均的卵粒清晰可见(图 1: c)。Ⅳ期中期卵巢呈砖红色，体积膨胀，表面血管交错粗大，卵粒大小比较均匀，两个卵巢的长度明显不同(图 1: d)。Ⅳ期末期卵巢呈灰色，卵粒饱满圆润，颗粒分离，但尚未成熟，若此期轻压鱼腹，卵粒不能流出(图 1: e-f)。

春季卵巢切片观察：Ⅱ期中期的卵巢主要由大小不一的初级卵母细胞和卵原细胞构成，卵母细胞间分布有结缔组织，具产卵板(图 2: g1-g2)。Ⅲ期初期卵巢细胞内出现卵黄泡，核空泡较大(图 2: g3-g4)。Ⅲ期中期卵巢的卵黄泡数量增加(图 2: g5)，核仁数减少，核空泡消失，核膜不明显，卵母细胞外被滤泡细胞包裹，滤泡细胞与周围的结缔组织构成滤泡膜，染色为深紫色(图 2: g6)。

夏季卵巢切片观察：相比春季，夏季卵巢有明显的发育，卵巢更饱满。Ⅲ期初期卵巢的卵母细胞开始产生卵黄泡和核空泡(图 2: h1)。Ⅲ期末期卵巢的卵黄泡明显增多，细胞核缩小，滤泡细胞体积发生变化(图 2: h2、h3)。Ⅳ期初期卵巢发育接近成熟，体积增大，卵黄颗粒开始向卵黄泡填充并逐渐充满细胞，细胞核开始发生变化，滤泡细胞体积增大为方形(图 2: h4)。与Ⅳ期初期卵母细胞相比，Ⅳ期中期卵母细胞卵黄颗粒逐渐充满整个细胞，且细胞体积更大(图 2: h5)，Ⅳ期末期卵母细胞中卵黄泡几乎消失，细胞核明显缩小且向一侧移动(图 2: h6)。

秋季卵巢切片观察：卵母细胞体积较小，相同视野下，存在多个时相卵母细胞，Ⅱ期卵巢主要由Ⅱ时相初期及中期卵母细胞构成(图 2: i1-i3)，Ⅲ期卵巢主要由Ⅲ时相初期卵母细胞构成(图 2: j4-j5)。

冬季卵巢切片观察：卵母细胞时相皆为Ⅱ时相初期和中期(图 2: j1-j4)。

夏季卵母细胞直径最大，卵黄颗粒充满视野，春季、秋季、冬季卵母细胞直径明显小于夏季。

2.4 精巢发育季节变化特点

巴马拟缨鱼精巢如图 3所示。Ⅱ期初期精巢紧贴于鳔腹面两侧，呈半透明的细线状(图 3：k)。Ⅱ期末期半透明细线状的精巢逐渐发育至乳白色棒状(图 3：l)。Ⅲ期末期精巢血管发达，呈淡红色，体积增大(图 3：m)。雄鱼性腺大多都处于Ⅱ期。

春季精巢处于Ⅱ期，细胞核大且颜色较深，细胞质浅红色，具有透明泡状(图 4：n-q)。夏季Ⅲ期的精巢切片中，分布初级精母细胞和次级精母细胞，细胞小而密集(图 4：r)，精巢发育比春季的好。夏季Ⅳ期精巢切片染色为蓝紫色，视野充满次级精母细胞(图 4：s)。秋季精巢切片可见结缔组织向内部延伸，有大量初级精母细胞(图 4：t)。冬季雄鱼性腺全部退化为Ⅱ期，相较于秋季更加细长，且与腹腔脂肪交融，难以取出观察(图 4：u)。

3 讨论 3.1 性成熟年龄

不同种鱼类的初次性成熟年龄存在差异，同种鱼类雌雄个体初次性成熟年龄略有不同，一般为2-5龄^[8]。桂华鲮(Sinilabeo decorus)初次性成熟年龄为3龄^[9]。3龄的湘华鲮(S.decorus tungting)性腺已达到Ⅲ期，部分可达Ⅳ期^[10]。徽水河光唇鱼(Acrossocheilus fasciatus)初次性成熟年龄为3龄^[11]。红鳍原鲌(Cultrichthys erythropterus)初次性成熟年龄雌性为2.0龄，雄性为1.3龄^[12]。本研究中，巴马拟缨鱼2龄和3龄是构成全年样本年龄组成的主要部分，春、夏、秋3个季节样本的主要龄段均为2龄，在冬季为3龄；性腺分期全年以Ⅱ期为主；雌鱼Ⅱ期卵巢在2-5龄的占比从32.35%降至2.94%，Ⅲ期卵巢从2龄的14.71%升至3龄的20.59%，后降至4龄和5龄的2.94%，Ⅳ期卵巢仅在3龄和4龄出现；雄鱼Ⅱ期、Ⅲ期精巢在1-5龄中的占比较高，Ⅳ期精巢仅在2龄出现。可见，雌鱼产卵繁殖年龄为3龄和4龄，雄鱼精巢均在2龄时开始向高时相发育，推测雌鱼初次性成熟年龄为3龄，雄鱼为2龄。

3.2 繁殖季节

鱼类繁殖季节不同种之间存在差异。嘉陵江鮈亚科(Gobioninae)鱼类繁殖季节主要在春、夏季，分别占研究种类的44%、48%^[13]。云南盘鮈(Discogobio yunnanensis)繁殖期短暂，精巢会在3-4月快速达到Ⅳ、Ⅴ期^[14]。湘华鲮4龄以上性成熟雄鱼，3月精巢处于Ⅲ-Ⅳ期，4月下旬即可迅速达到Ⅳ、Ⅴ期^[10]。团头鲂(Megalobrama amblycephala)^{[15, 16]}的性腺发育、怀卵量在5月中旬可达最佳状态。红鳍原鲌的繁殖期主要集中在5-7月^[12]。黑边石斑鱼(Epinephelus fasciatus)性腺成熟期和产卵期出现在7-8月^[17]，桂华鲮在3-5月^[9]，唇鲮(Semilabeo notabilis)在2-5月^[18]。在本研究中，巴马拟缨鱼雌鱼性腺Ⅱ期在冬季占比最高，Ⅲ期在春季占比最高，Ⅳ期仅在夏季出现; 在夏季样本中，雌鱼3龄的占比最高，为66.67%，其Ⅲ期卵巢的占比远高于其他龄组，且Ⅳ期卵巢仅在3龄和4龄出现；雄鱼精巢在春、秋、冬季全为Ⅱ期，夏季全为Ⅲ、Ⅳ期，在夏季样本中，雄鱼2龄的占比最高，为50.00%，其Ⅲ期精巢的占比高于其他龄组，仅2龄的雄鱼精巢发育至Ⅳ期。因此，推测巴马拟缨鱼的主要繁殖季节是夏季。

3.3 繁殖类型

鱼类的性腺发育大多会受季节的影响^{[19, 20]}。王耀辉等^[21]发现不同季节的水流变化能够在不同程度上影响刀鲚(Coilia nasus)的性腺发育。黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)性腺在不同季节的性腺分期存在一定差异^[19]。人工养殖的光唇鱼在5月时性腺平均成熟系数全年最高，10月时最低^[22]。非洲鲇鱼(Clarias gariepinus)的繁殖期是每年的5-8月，休息期为9月至次年2月，完全配子发生期为3-4月^[23]。虹鳟(Oncorhynchus mykiss)产卵前的6个月水温需保持在5-13 ℃，过高或过低的水温均会对虹鳟性腺发育造成损伤^[24]。本研究中，巴马拟缨鱼红渡河群体卵巢发育以夏季最优，冬季最差，与光唇鱼^[25]、桂华鲮^[9]的卵巢发育季节性变化相似，可能是因为夏季红水河流速、水温和食物丰度增加，从而促进鱼类的性腺发育，冬季红水河水位下降，流速降低，水温下降，此时巴马拟缨鱼活动量较少，鱼体能量多用于维持体内正常的生命活动，导致卵巢发育减缓。

硬骨鱼类的产卵类型包括一次性产卵和多次性产卵^[26]，如光唇鱼^[27]、桂华鲮^[9]、唇鲮^[18]每年性成熟1次，属于一次性产卵鱼类；雌性鲶鱼(Silurus asotus)在产卵后，卵巢内还会存有大部分或者部分卵，属多次性产卵鱼类^[28]；厚唇裂腹鱼(Schizothorax irregularis)在3-5月产卵期产卵后的Ⅵ期卵巢中极少存在成熟的卵粒^[29]。本研究发现，巴马拟缨鱼Ⅳ期卵巢中卵子颗粒分明，大小比较一致，卵巢内卵母细胞发育同步；雌鱼性腺成熟系数只在夏季出现1次高峰，判断巴马拟缨鱼一年只排卵1次，属于一次性产卵鱼类。

本研究中，巴马拟缨鱼精巢发育在夏季仅少数鱼达到Ⅳ期，大多数是Ⅲ期，而其他季节处在Ⅱ期，这与长春鳊(Parabramis pekinensis)^[30]相似，黄鳝(Monopterus albus)也是春末夏初精巢发育成熟^[31]。然而，银鲳(Pampus argenteus)精巢在11月性成熟，越冬期精巢退化至Ⅲ期，部分个体精巢在翌年春季再次成熟^[32]。结合上述报道及本研究中雄鱼精巢的发育情况，推测巴马拟缨鱼雄鱼精巢发育迅速，发育时间和高时相维持时间短。

4 结论

巴马拟缨鱼广西红水河都安段红渡河群体性腺发育期以Ⅱ期时相为主(61.53%)，其次是Ⅲ期(30.59%)，最少为Ⅳ期(7.88%)；繁殖年龄为3龄和4龄。雌、雄鱼性腺发育仅在夏季达Ⅳ期，推测其主要繁殖季节为夏季。雌鱼一年只排卵1次，属于一次性产卵鱼类。雄鱼精巢发育迅速，但高时相维持时间短，因此巴马拟缨鱼人工繁殖应选择3龄亲本，且在夏季进行催产。